乳酸化修飾調控cGAS促進腫瘤生長

乳酸是糖酵解的最終產物，作為碳源和信號分子，為腫瘤發(fā)展提供代謝、微環(huán)境和免疫基礎。最近，乳酸被重新定義為表觀遺傳學的標志，通過組蛋白修飾實現(xiàn)免疫重塑和腫瘤進展。然而，大多數(shù)非表觀遺傳蛋白的乳酸化及其功能尚未被充分研究。

先天免疫系統(tǒng)通過多個模塊組成的信號級聯(lián)反應來響應入侵或細胞損傷。乳酸通過直接與MAVS結合抑制RLR信號轉導，但乳酸對先天免疫反應的胞質DNA感應的影響尚不清楚。cGAS被鑒定為感知胞質DNA并觸發(fā)先天免疫反應的關鍵酶，其活性和蛋白穩(wěn)定性受翻譯后修飾的調節(jié)。

泛素-蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）是蛋白質降解的主要途徑，但存在泛素非依賴性蛋白酶體降解（UbInPD）。UbInPD底物的特征和分子機制尚未明確。

本研究發(fā)現(xiàn)，乳酸通過促進cGAS的K21乳酸化，使其被蛋白酶體亞基PSMA4捕獲并降解，這一過程獨立于泛素。此外，乳酸還通過促進PIK3CB的K415乳酸化，抑制ULK1介導的PSMA4 S188磷酸化，從而影響PSMA4與cGAS的結合及cGAS的降解。這些機制共同促進了腫瘤生長，并與肺腺癌的預后相關。本項研究揭示了cGAS降解的新機制，并為癌癥治療提供了潛在的分子靶點。

乳酸化乳酸化協(xié)調 cGAS 的泛素非依賴性降解并促進腫瘤生長

結論1 乳酸誘導cGAS降解，獨立于泛素。

研究發(fā)現(xiàn)，MCT1是乳酸轉運的關鍵蛋白，敲除MCT1可顯著減輕LLC條件培養(yǎng)基誘導的cGAS降解。抑制或敲低LDHA（如使用FX11）可升高cGAS表達，并增強HSV感染時的干擾素產生。葡萄糖剝奪或2-DG處理促進cGAS表達，而缺氧則抑制其表達。機制上，乳酸通過蛋白酶體途徑降解cGAS，而非溶酶體途徑。阻斷蛋白酶體可逆轉乳酸誘導的cGAS降解，表明乳酸通過蛋白酶體途徑調控cGAS穩(wěn)定性。

圖1 乳酸破壞cGAS穩(wěn)定性

結論2 cGAS 的K21位點乳酸化修飾促進cGAS降解。

研究發(fā)現(xiàn)，乳酸通過促進cGAS的非泛素依賴性蛋白酶體降解來抑制干擾素的產生。質譜分析顯示，乳酸調節(jié)了cGAS與PSMA4和NQO1的相互作用。乳酸促進PSMA4與cGAS結合，而敲除PSMA4會阻斷乳酸誘導的cGAS降解。此外，cGAS在K21位點發(fā)生乳酸化修飾，K21R突變體（將K21突變?yōu)榫玜n酸）顯著抑制了乳酸誘導的cGAS降解，并增強了cGAS的蛋白穩(wěn)定性。

圖2 cGAS 的K21位點乳酸化修飾促進cGAS降解

結論3 PSMA4 Ser188位點的磷酸化穩(wěn)定cGAS。

研究發(fā)現(xiàn)，PSMA4 pS188對cGAS穩(wěn)定性有重要影響。構建PSMA4的rS188D突變體可穩(wěn)定cGAS蛋白，而rS188A突變則加速乳酸誘導的cGAS降解。乳酸化cGAS與PSMA4直接結合，但這種結合受到PSMA4 pS188的調控。具體而言，PSMA4 pS188通過影響cGAS與PSMA4的相互作用來穩(wěn)定cGAS，維持干擾素生成。

圖3 PSMA4 pS188 穩(wěn)定 cGAS

結論4 PIK3CB K415la位點的乳酸化穩(wěn)定cGAS。

研究發(fā)現(xiàn)，乳酸通過調控PIK3CB的K415la修飾影響其與P85β的相互作用，從而激活PI3K信號。乳酸或缺氧可增強PIK3CB的K415la修飾，破壞PIK3CB與P85β的結合，促進PIP3生成，進而影響PSMA4與cGAS的相互作用及其pS188水平。K415R突變可穩(wěn)定PIK3CB-P85β復合物，抑制乳酸誘導的cGAS降解，并促進干擾素生成。此外，PIK3CB的K415R突變阻斷了乳酸對PSMA4與cGAS相互作用的影響。這些結果表明，PIK3CB K415la在調控cGAS穩(wěn)定性和免疫反應中發(fā)揮重要作用。

圖4 PIK3CB K415的乳酸化促進 cGAS 降解

結論5 乳酸-cGAS軸線促進腫瘤生長

研究發(fā)現(xiàn)，cGAS K21la在腫瘤生長中具有重要作用。實驗中，將cGAS的野生型（WT）和K21R突變體重組到腫瘤細胞中，發(fā)現(xiàn)K21R突變體細胞的活力顯著降低，且cGAS表達下降被阻斷。LDHA抑制劑FX11可誘導cGAS表達，減少乳酸生成，并抑制腫瘤生長。體內實驗表明，cGAS K21R顯著抑制腫瘤生長，降低腫瘤重量，提高cGAS表達和CD8+ T細胞浸潤。PSMA4的rS188D突變抑制腫瘤生長，而rS188A則促進生長。PIK3CB的rK309R突變也抑制腫瘤生長，提高cGAS水平和CD8+ T細胞浸潤。cGAS或Sting的缺失使腫瘤對FX11失去敏感性。這些結果表明，cGAS K21la與腫瘤生長相關，并在針對乳酸生成的藥物的抗腫瘤效果中起關鍵作用。

圖5 乳酸-cGAS軸線促進腫瘤生長